Лабораторная диагностика: Ящур

Доступные исследования

Общая патология

• Выявление поражений, особенно пузырьков в области рыла и лап
• Плюсы:
  • Макроскопически легко определить везикулы
• Минусы:
  • Клинически неотличим от всех других везикулярных заболеваний
  • Обычно требует других диагностических подтверждений

• Выявляет наличие специфической последовательности вирусной нуклеиновой кислоты (РНК)
• Типы образцов: везикулярная жидкость или эпителий (предпочтительный тип образца), сыворотка, образец из пищевода и глотки (при отсутствии везикул или эпителия), молоко
• Плюсы:
  • Самый чувствительный и предпочтительный метод обнаружения возбудителя
  • Часто позволяет объединять образцы, что снижает затраты и минимизирует потерю чувствительности
  • Может быть направлен на универсальные белки для общего обнаружения или на серотип-специфические белки для серотипирования
• Минусы:
  • Умеренная стоимость
  • Требуются подходящие праймеры, особенно при работе со структурными белками, специфичными для серотипов.

Список известных в настоящее время серотипов ящура (перекрестной защиты между серотипами нет):

• Азия 1
• Южноафриканский Тип 1 (SAT 3)
• Южноафриканский Тип 1 (SAT 2)
• Южноафриканский Тип 1 (SAT 1)
• C
• A
• O

Иммуноферментный анализ на антиген (Ag-ELISA)

• Обнаруживает наличие антигена
• Типы образцов: везикулярная жидкость или эпителий (предпочтительный тип образца), сыворотка, образец из пищевода и глотки (при отсутствии везикул или эпителия), молоко
• Плюсы:
  • Предпочтительный метод обнаружения и идентификации серотипа
  • Может использоваться для диагностики на уровне отдельного животного или стада
  • Может использоваться для дифференциации серотипов
  • Любой положительный результат на вирус дикого типа считается значимым

Таблица 1. Различные вирусные белки могут быть использованы для решения диагностических задач

• Минусы:
  • Наличие вирусного антигена может быть серотип-специфичным.
  • Может потребоваться проведение нескольких тестов для определения серотипов.

Иммуноферментный анализ антител (АТ-ИФА)

• Выявляет наличие антител
• Типы образцов: сыворотка
• Плюсы:
  • Циркулирующие антитела можно обнаружить уже через 3–5 дней после появления клинических признаков.
  • У животных сохраняется положительный результат в течение нескольких месяцев.
  • Может использоваться в случаях заболевания в поздней стадии.
  • Может использоваться для дифференциации воздействия дикого типа от некоторых убитых/рекомбинантных вакцин (целевые неструктурные белки).
  • Любой положительный результат на дикий тип вируса считается значимым.
• Минусы:
  • Выработка антител специфична к серотипу
  • Некоторые животные могут оставаться серопозитивными в течение нескольких лет
  • Сила иммунного ответа может варьироваться в зависимости от вирулентности штамма
  • Наличие антител не всегда коррелирует с защитой.

Анализ бокового потока (LFD)

• Обнаруживает наличие антигена
• Типы образцов: везикулярная жидкость или эпителий
• Плюсы:
  • Предпочтительный метод обнаружения и идентификации серотипа
  • Может использоваться для диагностики на уровне отдельного животного или поголовь
  • Может использоваться для дифференциации серотипов
  • Любой положительный результат на вирус дикого типа считается значимым
• Минусы:
  • Наличие вирусного антигена может быть серотип-специфичным.
  • Менее чувствителен, чем Ag-ELISA.
  • Может потребоваться проведение нескольких тестов для определения серотипов.

Выделение вируса (VI)

• Выделяет живой вирус
• Типы образцов: везикулярная жидкость или эпителий (предпочтительный тип образца), сыворотка, образец из пищевода и глотки (при отсутствии везикул или эпителия), молоко
• Плюсы:
  • Традиционный золотой стандарт
  • Изолировать вирус для использования при разработке вакцин (аутогенные вакцины) или серологического тестирования (ИФА) для определения серотипа.
  Минусы:
  • Дорого
  • Медленное получение результатов
  • Требуются специальные клеточные линии: клетки щитовидной железы быка (телят) или клетки почек свиньи, теленка или ягнёнка
  • Процесс инокуляции трудоёмкий
  • Часто сложно выращивать (ложноотрицательные результаты)

Генетическое секвенирование

• Секвенирует генетическую нуклеиновую кислоту (РНК) вируса
• Типы образцов: везикулярная жидкость или эпителий (предпочтительный тип образца), сыворотка, образец из пищевода и глотки (при отсутствии везикул или эпителия), молоко
• Плюсы:
  • Может помочь в молекулярной эпидемиологии
  • Помогает определить серотип
• Минусы:
  • Дорого
  • Медленно достигаются результаты

Интерпретация результатов

Макроскопические поражения (везикулы)

• Положительный результат: необходимо провести обследование на предмет возможного ящура.
• Отрицательный результат: отрицательный результат или пропущенный, если тестирование проводится поздно после заражения или при заражении лёгким штаммом.

ПЦР

• Положительный результат: вирус присутствует
• Отрицательный результат: вирус мог быть пропущен, если тестирование проводилось поздно после заражения

Ag-ELISA

• Положительный результат: вирус присутствует
• Отрицательный результат: вирус мог быть пропущен, если тестирование проводилось поздно после заражения или тест был проведен на неправильный серотип

Ab-ELISA

• Положительный результат: материнские антитела или контакт с диким вирусом или некоторыми вакцинами в прошлом (более 2–3 дней)
• Отрицательный результат: отрицательный результат или контакт с вакциной или диким вирусом был слишком ранним для обнаружения, или тест на антитела не того серотипа

LFD

• Положительный результат: вирус присутствует
• Отрицательный результат: вирус мог быть пропущен, если тестирование проводилось поздно после заражения или тест был проведен на неправильный серотип

VI

• Положительный результат: вирус присутствует
• Отрицательный результат: вирус мог быть пропущен, если тестирование проводилось поздно после заражения или использовалась неправильная линия клеток

Genetic Sequencing

• Положительный результат: вирус присутствует
• Отрицательный результат: вирус мог быть пропущен, если тестирование проводилось поздно после заражения или вируса было слишком мало для секвенирования

Сценарии

Важно отметить, что в некоторых странах для проведения любого тестирования на ящур может потребоваться разрешение федеральных органов.

Подозрение на острую вспышку ящура у свиней любого возраста и в поголовье, не вакцинированном против ящура.

• Соберите везикулярную жидкость у нескольких пораженных животных и протестируйте ее с помощью Ag-ELISA или ПЦР; для ПЦР можно рассмотреть возможность объединения образцов

Подозрение на острую вспышку ящура у свиней любого возраста и в поголовье, вакцинированном против ящура

• Соберите везикулярную жидкость у нескольких пораженных животных и проведите тестирование с помощью ИФА с антигенами или ПЦР; для ПЦР можно рассмотреть возможность объединения образцов.
• Соберите сыворотку у нескольких пораженных животных, у которых клинические симптомы наблюдались не менее 3 дней, и проведите индивидуальное тестирование с помощью ИФА с антителами; исследуйте неструктурный белок, отсутствующий в вакцине.

Подозрение на циркуляцию ящура у свиней любого возраста без клинических признаков заболевания, если поголовье не вакцинировано против ящура

• Соберите сыворотку у 30 случайно отобранных свиней и протестируйте ее индивидуально с помощью Ab-ELISA; целевой структурный белок

Подозрение на циркуляцию ящура у свиней любого возраста без клинических признаков, если поголовье вакцинировано против ящура

• Соберите сыворотку у 30 случайно отобранных свиней и протестируйте ее индивидуально с помощью Ab-ELISA; определите неструктурный белок, которого нет в вакцине